โดยทั่วไปกำหนดการบำรุงรักษารถพยาบาลจะเป็นไปตามมาตรฐานการบำรุงรักษายานยนต์ของประเทศและข้อกำหนดทางเทคนิคของผู้ผลิตยานพาหนะ ขณะเดียวกันก็รวมเอาโปรโตคอลการจัดการที่ได้รับการปรับปรุงอย่างเหมาะสมซึ่งปรับให้เหมาะกับลักษณะการทำงานเฉพาะของยานพาหนะตอบสนองฉุกเฉิน โดยทั่วไป รถพยาบาลจะต้องมีระบบการบำรุงรักษาที่ครอบคลุม ซึ่งรวมการตรวจสอบรายวัน การบำรุงรักษาตามกำหนดเวลา และการตรวจสอบทางเทคนิคเฉพาะทางเพื่อให้แน่ใจว่ารถยังคงอยู่ในสถานะพร้อมปฏิบัติการตลอดเวลา
การตรวจสอบขั้นพื้นฐานควรดำเนินการทั้งก่อนและหลังการจัดส่งทุกครั้ง การตรวจสอบเหล่านี้ครอบคลุมถึงสภาพเครื่องยนต์ ระบบเบรก แรงดันลมยาง ไฟฉุกเฉิน และระบบไซเรน ตลอดจนสถานะการทำงานของอุปกรณ์ทางการแพทย์บนเครื่องบิน ปัญหาใด ๆ ที่ระบุจะต้องได้รับการแก้ไขทันที โดยทั่วไปการบำรุงรักษาตามกำหนดการจะดำเนินการตามระยะทางหรือช่วงเวลา- เช่น การให้บริการขั้นพื้นฐานทุกระยะทางที่เดินทาง (เช่น 5,000 ถึง 10,000 กิโลเมตร) หรือทุกๆ สามเดือน การบริการนี้รวมถึงงานต่างๆ เช่น การเปลี่ยนน้ำมันเครื่องและไส้กรองน้ำมันเครื่อง และการตรวจสอบแชสซี รวมถึงระบบไฮดรอลิกและระบบไฟฟ้า
เกี่ยวกับอุปกรณ์ทางการแพทย์ที่ติดตั้งภายในรถพยาบาล-เช่น เครื่องตรวจคลื่นไฟฟ้าหัวใจ เครื่องกระตุ้นหัวใจ และระบบจ่ายออกซิเจน- จะต้องกำหนดตารางการบำรุงรักษาแยกต่างหาก อุปกรณ์เหล่านี้ควรผ่านการสอบเทียบและการทดสอบเป็นประจำตามระเบียบการจัดการอุปกรณ์ทางการแพทย์อย่างเคร่งครัด นอกจากนี้ หลังจากปฏิบัติการที่มีความเข้มข้นสูง-เป็นเวลานานหรือเสร็จสิ้นภารกิจเฉพาะทาง ยานพาหนะและอุปกรณ์จะต้องได้รับการยกเครื่องทางเทคนิคเฉพาะทางเพื่อให้แน่ใจว่าหน่วยทั้งหมดจะรักษาความน่าเชื่อถือและความปลอดภัยในระดับสูงได้อย่างสม่ำเสมอ
